養(yǎng)殖場用非洲豬瘟檢測試劑盒也可用于環(huán)境檢測非洲豬瘟試劑盒

更新時間：2021-01-27

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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸即將展開，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學調(diào)查特性。

【試劑盒組分】

1傳承、試劑盒組成及貯藏條件

名稱	50 T	貯藏條件
1、反應液A	ImL	-20°C
2建言直達、反應液B	ImL
3多種、陽性對照	250μL
4、陰性對照	250μL
5充分發揮、PCR反應液	850μL
6發展成就、酶混合液	150μL

2、需自備材料：生理鹽水重要方式、無菌槍頭開展面對面、熒光PCR反應管、記號筆等。

【操作步驟】

一進一步提升、樣品制備

1空間廣闊、血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號備用不折不扣。

2支撐能力、組織樣品：采集脾臟、肝臟高效利用、淋巴結(jié)特征更加明顯、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大小）講理論，眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨的可能性，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘各領域，取上清液于滅菌離心管中應用領域，編號備用。

二進行培訓、DNA提取

取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管發展機遇，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘法治力量，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可全技術方案，若為抗凝全血，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液共享。

二信息化、PCR擴增

1、配液：取出PCR反應液生動、酶混合液新型儲能，在室溫*融化后，充分混勻新品技，瞬離範圍，可將酶混合液全取岀直接加入到PCR反應液中，充分混勻好宣講，瞬離后按每份20μL分裝使用註入新的動力；或按照每份PCR反應液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量，混合兩種反應液,瞬離后按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應管中，剩余試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）

2戰略布局、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照事關全面，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運行以下程序：

步驟	條件	循環(huán)數(shù)
UNG處理	50°C： 2分鐘	1
預變性	95°C： 3分鐘	1
預擴増	95°C： 8 秒 55C： 8 秒	5
PCR擴增	95°C： 8 秒 55°C： 8 秒	40

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個循壞的55°C時收集熒光信號。設置擴增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式狀態。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒技術節能。)

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