非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒說明書

                                       獸用

【獸藥名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒

商品名稱：無

漢語拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

【主要成分與含量】

【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液共創美好、豬肉組織、淋巴結、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測問題分析。

【用法與判定】

1 用法

1.1 樣品處理及模板準備

1.1.1 樣品處理

·組織樣品處理：分別從豬肉組織著力提升、淋巴結落實落細、脾臟不同位置取樣能力建設，用手術剪剪碎混勻后取0.1g于研磨器中研磨要落實好，加入1.5ml生理鹽水繼續(xù)研磨良好，待勻漿后轉至1.5ml無菌離心管逐步顯現，12000 r/min離心2分鐘，取上清200μl備用引領。

·血液樣品無需處理自動化裝置，取200μl備用。

1.1.2 模板準備

·根據(jù)不同的樣本類型應用前景，按照下表準備相應的樣本用量有很大提升空間。

·將樣本加入到1.5 ml離心管中，加入下表推薦體積的Solution A首次，渦旋震蕩20 s可能性更大，并按照下表推薦的處理方法，室溫靜置3-5 min搖籃，或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min技術。

·樣本充分裂解后（95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復室溫），加入下表推薦體積的Solution B推動，并渦旋震蕩30 s技術研究，12000rpm離心2min，上清即為模板DNA開展研究。

·處理后的樣本如在2小時內(nèi)進行下一步試驗姿勢，請于4℃保存，如不能立即進行下一步試驗培養，請于-20℃保存交流研討。

備注：組織樣本加入10倍體積的生理鹽水制成組織勻漿液后，可按照血液樣本的處理方法進行處理建設應用。

1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應支撐作用，效果更佳

1.2 熒光PCR擴增

1.2.1 試劑準備

實驗前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復至室溫，使其*融化動力，充分混勻后瞬時離心去除管壁吸附液體同時。

1.2.2 配制反應體系

按下表1體系，在配套PCR管中配制反應體系效高性，蓋緊管蓋后瞬時離心10秒模式，轉移至擴增區(qū)。

表1  PCR反應體系

1.2.3 PCR擴增

快速模式

表2 儀器PCR擴增參數(shù)

2 判定

2.1 合理調(diào)整閾值線高品質，不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。

2.2 試劑盒有效性判定

·陰性對照：無Ct值支撐能力，線形為直線或微斜資源優勢，無明顯指數(shù)增長。

·陽性對照：Ct值≤30特征更加明顯，有明顯指數(shù)增長估算，呈典型的S型曲線。

2.3 樣本結果判定

·樣本檢測結果Ct值≤38的可能性，有明顯指數(shù)增長奮戰不懈，判定為陽性，表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒措施。

·樣本檢測結果38＜Ct≤40大大縮短，判定為可疑。應對樣本進行復測緊密相關，若復測結果Ct值仍在38~40之間更默契了，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性培訓，否則為陰性不合理波動。

·樣本檢測結果無Ct值，判定為陰性分析，表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒表示。

【注意事項】

（1）實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按步驟執(zhí)行非常激烈，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導致錯誤結果競爭力所在。

（2）所有試劑應在規(guī)定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應充分混勻領域。試劑盒反復凍融次數(shù)不宜超過5次溝通機製。

（3）實驗操作應按照國家有關臨床基因擴增實驗室管理規(guī)范執(zhí)行好宣講，實驗過程應分區(qū)（試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)領先水平、核酸擴增區(qū)），各區(qū)物品為，不得交叉使用戰略布局，避免污染事關全面。

（4）操作臺、移液器狀態、離心機等儀器用品應經(jīng)常用1%次氯酸鈉技術節能、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應進行無酶處理基石之一。

（5）待檢樣本聯動、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質處理方法進行處理增持能力。

（6）為防止熒光干擾共同努力，應避免使用含熒光物質的手套，避免用手直接接觸追求卓越，預防交叉污染逐漸完善。

（7）檢測結果為陰性，并不*代表為非感染狀態(tài)合理需求，具體診斷需結合獸醫(yī)臨床是目前主流。

（8）產(chǎn)生假陰性的可能原因為：待檢樣本在采集、運輸高質量、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解充分發揮；樣本中核酸濃度低于低檢測限；病毒待測靶基因出現(xiàn)變異管理；未經(jīng)驗證的其他干擾因素設計。

（9）產(chǎn)生假陽性的可能原因為：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發(fā)生交叉污染覆蓋範圍。

【規(guī)格】 50反應/盒

【貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存優化程度，有效期為12個月。

【生產(chǎn)企業(yè)】 廣州悅洋生物技術有限公司

僅供獸醫(yī)診斷使用